Hücre Serilerinde Kilitli Nükleik Asitler İle MIR223 Gen Sessizleştirmesi

Abstract

Amaç:Kodlama yapmayan küçük RNA’lar hücre farklılaşması, büyümesi, gelişmesi, immün reaksiyonlar, stres adaptasyonu gibi fizyolojik süreçlerin yanı sıra, kanser, kalp hastalıkları gibi kompleks hastalıklarla da ilişkilendirilmiştir.MIR223, hematopoetik sisteme özgü bir miRNA’dır. T-hücreli Akut Lenfoblastik Lösemi (T-ALL) patogenezine katkıda bulunan miRNA’lar arasında yüksek anlatıma sahip olduğu ve onkomir olarak aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Bu çalışmadaMIR223geninin T-ALL hücre serilerinde alternatif bir yaklaşım olarak özgün kilitli nükleik asit (KNA) kullanılarak baskılanması ve gen sessizleştirme etkinliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem:Kültüre edilen T-ALL hücre serilerine (Jurkat ve Molt4), 24 ve 48 saatlik sürelerde, 100 ve 150pmol konsantrasyondaMIR223’e özgü KNA uygulanmıştır. Her iki zaman aralığında RNA izolasyonu sonrası, stem loop polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile cDNA sentezlenerek, kantitatif gerçek zamanlıPZR(QRT-PZR) ile miRNA anlatım düzeyleri belirlenmiştir.Bulgular:Her iki hücre serisinde de 24. saatte, 150pmol KNA, sadece transfeksiyon ajanı uygulanmış (Mock) hücrelerle karşılaştırıldığındaMIR223düzeyinin yüksek oranda baskılandığı gözlenmiştir (Jurkat %73,p=0,001ve Molt4%80p=0,04). Molt 4 hücre serisinde anlamlı düzeyde baskılanma 48. saatte devam etse de (p=0,005), Jurkat hücre serisinde 48. saatteki baskılama istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır.Sonuç:MIR223onkogenik etki gösteren bir miRNA olarak tanımlanmıştır ve antisens oligolar ileMIR223geninin sessizleştirilmesi T-ALL gibi artmışMIR223anlatımı gösteren kanserlerde hastalığın seyrini ve tedavi alternatiflerini araştırma imkanı sağlamaktadır. Bu çalışmada T-ALL hücrelerinde alternatif bir RNA interferans (sessizleştirme) uygulaması olarak KNA kullanılmıştır ve bu moleküllerin çok etkin ancak kısa süreli olarak kullanılabileceği görülmüştür.