Detection of Neospora caninum in aborted bovine fetuses and dam blood samples by ELISA, histopathology, immunohistochemistry and PCR in Trakya Region, Turkey.

Abstract

Trakya Bölgesindeki Sığır ve Abort Olmuş Sığır Fötuslarında Neospora caninum’un ELİSA, Histopatoloji, İmmunohistokimya ve PCR Yöntemleriyle Teşhisi.

Erdogan Bamac O.1*, Haktanir D.1, Cetinkaya H.2, Yuzbasioglu Ozturk G.1, Arun S.S.1, Gurel A.1

Neospora caninum dünyadaki birçok ülkede sığırlarda görülen abortların önemli nedenlerinden biridir ve ciddi ekonomik kayıplara yol açtığı bilinmektedir. Bu çalışmada, Trakya Bölgesindeki sığırlarda ve abort olmuş sığır fötuslarında N. caninum’un varlığının histopatoloji, immunohistokimya (IHC), Polymerase Chain Reaction (PCR) ve Enzyme-Linked İmmunoSorbent Assay (ELİSA) yöntemleriyle ortaya konması amaçlanmıştır. 2014-2015 tarihleri arasında Trakya Bölgesindeki süt çiftliklerinde abort yapmış 50 adet sığır tespit edilerek, bu sığırların kanları ve abort olmuş fötusları toplanmıştır. Bu örnekler soğuk zincir ile laboratuvara getirilmiştir. Laboratuvarda kan örneklerinden serum eldesi yapıldıktan sonra ELISA testi için -20 C°’de saklanmıştır. Yapılan nekropsiler ile fötusların organlarından (beyin, beyincik, omurilik,, kalp, karaciğer, akciğer, böbrek, göbek kordonu) doku örnekleri alınarak, histopatolojik ve immunohistokimyasal incelemeler için formaldehit solüsyonunda saklanmıştır.Ayrıca, bu organlardan 20 gr kadarı 1.5 ml’lik tüplere konularak, DNA ekstraksiyonu ve PCR metodu ile incelenmek üzere önce – 80 C°’de, ardından -20 C°’de saklanmıştır. Yapılan histopatolojik incelemeler sonucunda toplam 50 fötustan 9’unun beyninde ensefalitis (%4.5), 12’sinin kalbinde miyokarditis (%6), 26’sının akciğerinde pnömoni (%13) ve 4’ünün böbreğinde nefritis (%2) saptanmıştır. PCR sonuçlarına göre 5 fötusa ait organlarda (beyin, beyincik, medulla spinalis, göbek kordonu, böbrek, akciğer, karaciğer ve kalp) pozitiflik (%2.5) saptanmıştır. ELİSA sonuçlarında pozitiflik daha yüksek olmakla birlikte (%4), PCR bulgularını desteklemektedir. Immunohistokimya ile 5 fötusta sadece beyin ve kalpte işaretlenme sağlanmıştır (Pozitiflik % 2.5).

Histopatoloji, seroloji, immunohistokimya ve PCR bulgularının birbirlerini destekledikleri saptanmıştır.