MODİFİYE KİTOSANIN YENİ BİR GEN TAŞIYICI SİSTEM OLARAK TRANSGENEZİSDEKİ ETKİNLİĞİ

Abstract

Transgenesis için gen salımını sağlayan taşıyıcı sistemler yapılarına göre viral ve viral olmayan olmak üzere iki sınıfa ayrılmaktadır. Biyopolimerler hücre içi gen taşıyıcı olarak kullanılmaktadır. Son yıllarda, kitosan viral olmayan gen taşıyıcı sistem olarak en çok tercih edilen biyopolimerlerden biridir.

Bu çalışmada, RMChi sentezi, kitosan molekülünde transfeksiyon etkinliğini arttıran modifikasyon yoluyla sentezlendi ve nanopartikül nRMChi ile pDNA arasında kompleks oluşumu gerçekleştirildi. Transfeksiyon etkinliği testleri için, Primer Koyun Fibroblast (POF) ve İnsan Embriyonik Böbrek (HEK293) hücreleri kullanıldı. Transfeksiyon etkinliği; Olimpus IX71 marka mikroskop kullanılarak 460-480 nm floresans ışığında GFP oranının tespiti ile analiz edildi.

Sonuç olarak, nRMChi’nin transfeksiyon etkinliği POF ve HEK293 hücrelerinde; polimer:pDNA oranı 5:1 ve 7:1’de pDNA miktarı 0,5 ve 2 μg’da sırasıyla %90 ve %10 oranlarında bulundu.

Bu çalışmada sentezlenen nRMChi’nin gen taşıyıcı olarak kullanılabileceği sonucuna varıldı.

Bu çalışma İstanbul Üniversitesi BAP Koordinasyon Birimi tarafından 7383 ve 31781 no’lu projeleri ile desteklenmiştir. Geliştirilen nanopartikül formülasyonu için TPE (09.09.2014-2014/10605) ve EPO patent başvuruları yapılmıştır (09.09.2014–EP14184168)ve işlemler devam etmektedir.