Effects of Growth Conditions on tri4 Gene Expression in Fusarium culmorum

Abstract

tri5 gen kümesindeki tri4 geninin anlatımı DON üretimi için temeldir. Bu çalışmada, farklı büyüme koşullarının tri4 anlatımı üzerindeki, dolaylı olarak da DON üretimi üzerindeki etkisi Fusarium culmorum’un F15 izolatında qPZR (gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu) aracılığıyla araştırıldı. Kontrol grubu patates dekstroz agar (PDA) ortamında 25°C’de üretildi (pH 5.6). Sıcaklığın etkisi 8°C ve 15°C uygulamalarıyla test edildi. pH 3.0 ve -7.0’nin etkisi 25°C’de üretilen kültürlerde incelendi. Ek olarak, 0.5 mM hidrojen peroksit (H2O2) besi ortamına diğer bir faktör olarak eşzamanlı eklendi. Bütün deney gruplarından yüksek kalite (A260/280= 1.9-2.0) ve miktarda (2-3μg/μL) total RNA izolasyonu gerçekleştirildi. β-tubulin geninin anlatımı içsel kontrol olarak kullanıldı. Elde edilen rölatif kantitasyon değerleri kaydedildi. tri4 anlatımı pH 3.0 koşulundaki grup hariç tüm deney gruplarından belirlendi. x Cp değerleri 22.26±1.14-26.84±4.79 aralığında hesaplandı. Deney gruplarındaki tri4 anlatım düzeylerinin kontrol grubuna göre daha düşük olduğu saptandı. ΔΔCT ve 2-ΔΔCT değerleri sırasıyla 0- 5.54 ve 0-0.582 idi. En yüksek tri4 anlatımı kontrol grubunda kaydedilirken, en düşük anlatım pH 5.6/15°C koşullarında belirlendi. Bulgular, farklı pH ve sıcaklık değerleri ile H2O2 uygulamasının tri4 anlatımındaki azalmayla sonuçlandığını gösterdi. Ayrıca, asidik pH’nın DON üretiminin potansiyel bir baskılayıcısı olduğu belirlendi. Bulgular mikotoksinlerin tarlada ya da hasat edilmiş tahıllarda gen anlatımı analizine dayalı olarak belirlenebilmesi için kit geliştirilmesi gereksiniminin önemini desteklemektedir.