Hücre Serilerinde Kilitli Nükleik Asitler İle MIR223 Gen Sessizleştirmesi

Abstract

Kodlama yapmayan küçük RNA’lar hücre farklılaşması, büyümesi, gelişmesi, immün reaksiyonlar, stres adaptasyonu gibi fizyolojik süreçlerin yanı sıra, kanser, kalp hastalıkları gibi kompleks hastalıklarla da ilişkilendirilmiştir.hematopoetik sisteme özgü bir miRNA’dır. T-hücreli Akut Lenfoblastik Lösemi (T-ALL) patogenezine katkıda bulunan miRNA’lar arasında yüksek anlatıma sahip olduğu ve onkomir olarak aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Bu çalışmada&nbsp;geninin T-ALL hücre serilerinde alternatif bir yaklaşım olarak özgün kilitli nükleik asit (KNA) kullanılarak baskılanması ve gen sessizleştirme etkinliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem:Kültüre edilen T-ALL hücre serilerine (Jurkat ve Molt4), 24 ve 48 saatlik sürelerde, 100 ve 150pmol konsantrasyonda&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">MIR223</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">’e özgü KNA uygulanmıştır. Her iki zaman aralığında RNA izolasyonu sonrası, stem loop polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile cDNA sentezlenerek, kantitatif gerçek zamanlı&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">PZR&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">(QRT-PZR) ile miRNA anlatım düzeyleri belirlenmiştir.</span></p><p><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-weight: 700;">Bulgular:&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">Her iki hücre serisinde de 24. saatte, 150pmol KNA, sadece transfeksiyon ajanı uygulanmış (Mock) hücrelerle karşılaştırıldığında&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">MIR223&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">düzeyinin yüksek oranda baskılandığı gözlenmiştir (Jurkat %73,&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">p=0,001&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">ve Molt4%80&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">p=0,04</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">). Molt 4 hücre serisinde anlamlı düzeyde baskılanma 48. saatte devam etse de (</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">p=0,005</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">), Jurkat hücre serisinde 48. saatteki baskılama istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır.</span></p><p><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-weight: 700;">Sonuç:&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">MIR223&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">onkogenik etki gösteren bir miRNA olarak tanımlanmıştır ve antisens oligolar ile&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">MIR223&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">geninin sessizleştirilmesi T-ALL gibi artmış&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro; font-style: italic;">MIR223&nbsp;</span><span style="font-size: 8pt; font-family: MinionPro;">anlatımı gösteren kanserlerde hastalığın seyrini ve tedavi alternatiflerini araştırma imkanı sağlamaktadır. Bu çalışmada T-ALL hücrelerinde alternatif bir RNA interferans (sessizleştirme) uygulaması olarak KNA kullanılmıştır ve bu moleküllerin çok etkin ancak kısa süreli olarak kullanılabileceği görülmüştür.</span></p></div></div></div>